Práctica Virtual 2. Tinción de Gram 🦠🧫🔬
Objetivo:
Que el alumno aprenda a identificar la morfología celular bacteriana mediante la Tinción de Gram en el laboratorio virtual. Además, se empleará este método para visualizar la morfología de las bacterias de un yogurt contaminado y conocer qué tipo de bacterias están presentes en ese medio.
Fundamento teórico:
En
la década de 1880, en un hospital de Berlín trabajó el médico danés Hans
Christian Gram, quién desarrolló la más importante tinción bacteriológica. Él
desarrolló una técnica de tinción en la cual observaba bacterias en tejidos de
pulmones de pacientes que morían de neumonía. El procedimiento que desarrolló, ahora
llamado tinción de Gram, demostró dos categorías generales de bacterias que
causaban neumonía: algunas se teñían de violeta y otras se teñían de rojo.
Las
bacterias teñidas de azul fueron conocidas como Gram positivas, y las teñidas
de rojo como Gram negativas. Pero fue hasta 1963 cuando M.R.J. Salton explicó
el mecanismo de diferenciación de la técnica de Gram.
La
tinción de Gram es considerada una tinción diferencial ya que clasifica las
bacterias en dos grandes grupos. Se llama bacterias Gram positivas a aquellas que
retienen la tinción azul-violeta, y se denomina bacterias Gram negativas a las
que se decoloran y después se tiñen con safranina.
Esta diferencia de tinciones se debe a la estructura de las paredes celulares de ambos tipos de bacterias. Las bacterias Gram positivas tienen una pared gruesa compuesta de peptidoglucanos y polímeros, e impermeable, que hace que resista la decoloración. En cambio, las bacterias Gram negativas tienen una capa delgada de peptidoglucanos más una bicapa de lipoproteínas que se puede deshacer con la decoloración.
La
tinción de Gram puede proporcionar información rápida para diagnósticos de
infecciones, puede revelar los agentes causales incluso con una toma de muestra
no adecuada. También hace posible distinguir entre contaminación de la muestra
y una verdadera infección. Puede ayudar al clínico a seguir o cambiar un
tratamiento antibiótico inicial antes de los resultados del cultivo, y en algunos
casos, es capaz de mostrar la necesidad de una atención médica urgente.
Actualmente
la tinción de Gram sigue siendo un método eficaz e importante en el
laboratorio, además de que es rápido y económico, por lo que se debe
estandarizar para evitar errores técnicos o de interpretación.
Para
este procedimiento se utilizan cuatro químicos importantes para el análisis,
los cuáles son: cristal violeta, lugol (mordiente), alcohol-acetona y safranina.
La función del cristal violeta es teñir las bacterias color violeta este indicará las bacterias Gram positivas el
cuál se une a la pared celular bacteriana debido a que tiene afinidad con el peptidoglucano
ya que el peptidoglucano de las bacterias Gram positivas es más gruesa. El lugol
funciona como mordiente, es decir, para la unión o fijación del colorante e impide
la salida del cristal violeta. El alcohol-acetona enjuaga el exceso de colorante
dejando solo el tinte fijado a la bacteria, decolora el complejo iodo- cristal violeta y deshidrata la pared bacteriana y
cierra los poros de ésta. Y la función de la safranina es que sirve para teñir
las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta por lo que teñirá
de rosado las bacterias Gram negativas. El agua también es importante para este procedimiento porque este elimina el exceso de colorantes.
https://virtuallabs.nmsu.edu/stain.php
-Portaobjetos
-Cristal-violeta
-Lugol
-Alcohol al 95%
-Safranina
-Agua
-Tubo de ensayo
-Asa de inoculación
-Puente de coloración
-Papel absorbente
-Mechero de Bunsen
-Pinzas metálicas
-Etanol al 70%
-4 Goteros
-Diluyente: Solución salina tamponada con fosfato (PBS)
-La muestra que se usará, en este caso es yogurt contaminado
-Pipeta
Metodología:
Resultados y observaciones
En la figura. 1 encontramos en el microscopio bacterias Gram positivas y no hay rastros de bacterias Gram negativas debido a que se tiñeron de color morado. Se observan cocos Gram positivos.
Las bacterias Gram positivas y las bacterias Gram negativas tienen diferente grosor en el peptidoglicano de su pared celular, de tal forma que cuando añadimos el cristal violeta se nos teñirán las bacterias Gram positivas de color morado debido al grosor del peptidoglicano. El lugol lo que hará, será fijar el colorante del cristal violeta a las bacterias. Con el alcohol (o mezcla decolorante), lo que haremos será eliminar el cristal violeta de las Gram negativas y por último, la safranina, va a teñir solamente a las Gram negativas de color rosado. Por lo tanto, las Gram positivas estarán teñidas de cristal violeta y las Gram negativas de safranina (color fucsia)
Conclusiones
En definitiva podemos concluir
con esta práctica que logramos identificar cuáles eran las bacterias Gram
positivas y Gram negativas mediante la práctica de tinción, todo esto nos ayudó
a comprender el por qué de los diferentes tipos de tinciones, que cambia debido
a su pared celular, en el caso de la bacteria Gram positiva el color es azul o
violeta debido a que la pared celular es más gruesa y por otra parte en el caso
de la Gram negativa es rojo o rosa debido a la pared celular cuyo grosor es
menor.
Referencias
González Meléndez, R. C., Elizalde Cuevas, B., Cortés Cruz, M. E., & Orduña Sánchez, M. (2020). Las tinciones básicas en el Laboratorio de Microbiología: Un enfoque gráfico. [Libro electrónico]. Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Zaragoza. Recuperado 18 de marzo de 2022, de https://www.zaragoza.unam.mx/wp-content/Portal2015/publicaciones/libros/cbiologicas/libros/Tinciones.pdf
Rodríguez, P. A., & Arenas, R. (2018). Hans Christian Gram y su tinción. Dermatología Cosmética, Médica y Quirúrgica, 16(2), 166–167. https://www.medigraphic.com/pdfs/cosmetica/dcm-2018/dcm182n.pdf
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