Práctica Virtual 1 Técnica de Siembra en Estría en Placa
Objetivo: Que el alumno aprenda diferentes técnicas de siembra y aislamiento de cultivos de bacterias y levaduras en medios sólidos y practique la técnica de siembra por estría en laboratorio virtual.
Fundamento teórico
Para
efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos
que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales, en los que es posible
cultivarlos bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de microorganismo.
Una de las técnicas más usadas en el laboratorio de microbiología consiste en
transferir una muestra microbiológica de un ambiente determinado a un medio de
cultivo, lo que permite obtener cultivos microbianos.
El cultivo de siembra por estría es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Los estudios que implican cultivos microbianos a menudo requieren la identificación de los organismos presentes en un cultivo. Cuando una pequeña porción de ese cultivo se inserta en un medio nutriente que contiene agar, es posible separar una masa de bacterias individuales en unidades que forman colonias. Cada una de estas unidades se desarrolla en colonias discretas que muestran características que ayudan a identificar el organismo.
Lista de materiales
- Mechero de Bunsen
- 1 placa de petri con cultivo bacteriano
- 1 placa de petri con agar nutritivo
- Asa de inoculación
- Incubadora
Metodología
Resultados y observaciones
Figura. 1
En la figura. 2 se observa que en el tercer cuadrante se formó una colonia aislada, su color es cremoso translúcido, su forma es circular. Al ser una práctica virtual no se puede observar el borde de elevación pero se puede apreciar una forma pulvinada y un margen lobulado
Figura. 2
En la figura. 3 se observan pocas colonias aisladas, detalladamente en el cuadrante dos y tres y en las áreas de la placa de Petri que se formaron colonias fueron en los cuadrantes uno y cuatro. Algunas colonias tienen forma circular, puntiforme e irregulares. Su color es entre café y beige. Se observa una elevación elevada ya que tienen un aspecto engrosado. Y los bordes de las colonias se observan enteras.
En la figura. 4 en el cuadrante dos y tres se observan algunas colonias aisladas y en los cuadrantes uno y cuatro se ven colonias formadas. Su color es amarillo de forma puntiforme, circular e irregular con borde entero. Se observa también textura lisa y elevación convexa.
Figura. 4
En la figura. 5 se puede visualizar cómo la placa presenta pocas colonias aisladas, únicamente visibles en el último cuadrante. De igual forma, presenta un color entre marrón claro y crema. Se observa una forma circular, irregular y puntiforme. Se podría decir que tiene una elevación plana, pero también elevada en algunas partes ya que tiene aspecto grueso. Y finalmente un margen entero en los primeros dos cuadrantes, pero lobulado en los últimos dos.
Conclusión
Para finalizar podemos mencionar que las colonias bacterianas tienen una medida, forma, textura y en algunos casos un color característico, que aunque puede variar de acuerdo al medio en que se encuentren, es constante bajo condiciones controladas y depende de la especie bacteriana que la forme. En esta practica se utilizó la técnica de siembra en estría en placa para poder observar la morfología, cada compañero anotó las características que lograba visualizar, las cuales fueron variando dependiendo la muestra o el cuadrante. Sin embargo, podemos notar en los resultados que la mayoría apreciaba un color entre blancuzca, café y beige. En relación a la forma, esta cumplía las mismas características, considerándola puntiforme, circular e irregular. Por otra parte, fue un poco complicado lograr identificar con certeza la elevación, debido a que era una practica virtual; pero llegamos a la conclusión que se podía observar plana, pero también elevada en algunas partes ya que tiene aspecto grueso. La siembra en estría en placa resultó ser una técnica muy útil para conocer la morfología de las bacterias y fácil de realizar.
Cuestionario
1. ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de la técnica de estría cruzada virtual vs real?
Virtual
Ventajas:
· -Nos ayuda
a practicar la técnica de estría cruzada y autoevaluarnos
· -Visualizar
la forma correcta de la estría cruzada
Desventajas:
-Al hacerse de forma virtual se cuenta con poca precisión al realizar el barrido de la asa de inoculación
Real
Ventajas:
-Es una técnica rápida de realizar
-Es la técnica más utilizada para aislar los microorganismos en una placa de agar
-Es un buen método cualitativo para conocer las estructuras morfológicas de un organismo
Desventajas:
-No es eficiente para realizar un conteo adecuado de colonias aisladas
-No permite hacer un estudio auto ecológico
2. ¿Qué tipo de tinciones se puede realizar para identificar la morfología del moho?
-Tinción de Grocott (GMS): Se usa para la identificación de hongos y bacterias, mayormente en muestras de pacientes con infecciones respiratorias y neumonías. Ej: infección por Pneumoystis Jirovecii en pacientes inmunocomprometidos o con HIV. La reacción tintorial está basada en que en presencia de ácido peryódico, los polisacáridos de la pared celular de los hongos son oxidados a aldehídos que a su vez reducen el complejo Nitrato-Plata Metenamina produciendo una coloración café a negra debido al depósito de plata reducida, en los lugares de localización de los aldehídos. Con esta técnica los hongos se tiñen de color negro: la mucina adquiere un color gris oscuro; las partes internas del miscelio rosa oro; el fondo aparece de color verde claro.
-Tinción
de PAS (Periodic- Acid Schiff): Permite visualizar elementos infecciosos como
parásitos y hongos. Tiene la ventaja de que el tejido adyacente al hongo se
observa mejor.
-Tinción
de Ziehl-Neelsen o ácido resistente: Se utiliza para el diagnóstico de
enfermedades crónicas como la tuberculosis o la actinomicosis. Ha demostrado
ser una de las tinciones características más útiles y significativas para
separar los bacilos tuberculosos y los microorganismos relacionados. Es una
técnica rápida, fácil y de bajo costo, lo que permite que se pueda realizar en
casi cualquier laboratorio clínico. Esta tinción permite diferenciar a las
bacterias en dos grupos: aquellos que son capaces de resistir la decoloración
con alcohol-ácido y aquellos que no lo son.
-Tinción
de azul de algodón lactofenol: Esta tinción se utiliza en el laboratorio de
micología para la demostración de la mayoría de los hongos miceliales. El azul
de lactofenol tiene tres funciones importantes al momento de observar hongos
del tipo mohos obtenidos por aislamiento de medios inoculados. El fenol inactiva
las enzimas líticas de la célula e impide que ésta se rompa; de igual forma,
destruye la flora acompañante e inactiva a la célula, quitándole el grado de
patogenicidad; además, actúa como mordiente cuando se usa en combinación con
colorantes. El ácido láctico preserva las estructuras fúngicas al provocar un
cambio de gradiente osmótico con relación al interior fúngico, lo que genera
una película protectora. El azul de algodón es un colorante ácido, que tiñe el
citoplasma y la quitina presente en las células fúngicas, mientras que el
glicerol mantiene húmeda la preparación.
3. Investigue la composición química del medio AN Y PDA.
-Agar Nutritivo: El medio contiene extracto de carne, peptona y agar, siendo una formulación suficiente para el desarrollo de los microorganismos. El extracto de carne proporciona al medio fuente de carbohidratos, de nitrógeno y vitaminas.
Composición: Agar 15.0 gr/L, pluripeptona 5.0 g/L y extracto de carne 3.0 g/L
-Agar Papa Dextrosa (PDA): Este medio preparado en el laboratorio se compone de 250 g de trozos de papa con cascaras, 20 g de dextrosa y 20 g de agar agar, todo esto para 1 1 de agua destilada. L. La infusión de papa como fuente de almidones y la dextrosa son la base para el crecimiento de hongos y levaduras. El bajo pH (3.5) evita el crecimiento de las bacterias.
Composición: Agar 15.0 g/L, dextrosa 20.0 gr/L, infusión de papa 4.0 g/L
Referencias
Microbac, I. L. (s. f.). Microbac » Tipos de siembras. Labmicrobac. Recuperado 12 de marzo de 2022, de https://www.labmicrobac.com/tipos-de-siembras/
Tovar, C. O. N. A. L. E. P. F. (2012, 26 septiembre). Tecnicas y metodos de aislamiento y selección de microorganismos. conalepfelixtovar. Recuperado 12 de marzo de 2022, de https://conalepfelixtovar.wordpress.com/2012/09/26/tecnicas-y-metodos-de-aislamiento-y-seleccion-de-microorganismos/
Cosme, P. (s. f.). Cuestionario Práctica Estría Cruzada. StuDocu. Recuperado 9 de marzo de 2022, de https://www.studocu.com/es-mx/document/benemerita-universidad-autonoma-de-puebla/microbiologia/cuestionario-practica-estria-cruzada/9842600
Leading International Fungal Education. (s. f.). Fungal infections. life-worldwide.org. Recuperado 9 de marzo de 2022, de https://www.life-worldwide.org/esp/fungal-diseases/histopathology#:%7E:text=Las%20tinciones%20habituales%20para%20hongos,peri%C3%B3dico%20de%20Schiff%20(PAS).
Hajar Serviansky, T., Kresch Tronik, N. S., Moreno Coutiño, G., Arenas, R., & Vega Memije, M. E. (2013). Utilidad de la tinción PAS para el diagnóstico histopatológico. Dermatología Cosmética, Médica y Quirúrgica, 11(1), 13–18. https://www.medigraphic.com/pdfs/cosmetica/dcm-2013/dcm131c.pdf
Sociedad Argentina de Citología. (s. f.). Ficha – Coloración de Grocott. Recuperado 9 de marzo de 2022, de http://sociedaddecitologia.org.ar/sac/casos/coloracion-de-grocott/#:%7E:text=La%20tinci%C3%B3n%20de%20Grocott%20se,inmuno%20comprometidos%20o%20con%20HIV.
López Jácome, L. E., Hernández Durán, M., Colín Castro, C. A., Ortega Peña, S., Cerón González, G., & Franco Cendejas, R. (2014). Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación en discapacidad, 3(1), 10–18. https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
González Meléndez, R. C., Elizalde Cuevas, B., Cortés Cruz, M. E., & Orduña Sánchez, M. (2020). Las tinciones básicas en el Laboratorio de Microbiología: Un enfoque gráfico. [Libro electrónico]. Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Zaragoza. Recuperado 9 de marzo de 2022, de https://www.zaragoza.unam.mx/wp content/Portal2015/publicaciones/libros/cbiologicas/libros/Tinciones.pdf
Narrea Cango, M., & Malpartida Zervallos, J. (2006). Evaluación de medios de cultivo en la producción de conidias y crecimiento diametral de cuatro cepas del hongo entomopatógeno. Revista Peruana de Entomología, 45, 145–147. https://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/entomologia/v45/pdf/a25v45.pdf
Probiotek. (s. f.). AGAR NUTRITIVO. Recuperado 9 de marzo de 2022, de https://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-nutritivo/#:%7E:text=El%20medio%20contiene%20extracto%20de,tipo%20de%20estudio%20por%20realizar.
Salazar, D. A. (2014, 25 agosto). Agar nutritivo. slideshare.net. Recuperado 9 de marzo de 2022, de https://es.slideshare.net/danielaandradesalazar12/agar-nutritivo-38346028
Probiotek. (s. f.-a). AGAR DE DEXTROSA Y PAPA. Recuperado 9 de marzo de 2022, de https://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-de-dextrosa-y-papa/
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